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Propuesta validación ensayo de extracción y cuantificación de ADN
Autor:  Etxe Fecha: 7/03/13 11:07

Buenas,

 

Estoy iniciando un proceso de implantación de la ISO 17025 en un laboratorio de secuenciación y genotipado. En este sentido, se me plantean varias dudas en cuanto a la validación del método de ensayo para la extracción y cuantificación de ADN.

No se como plantear la validación del método, ya que parece que es un ensayo cualitativo (aunque  los alcances de acreditación se refieren a cuantificación), y por otro lado, me comentan que no es necesario estimar la incertidumbre en estos ensayos.

¿Alguien tiene alguna sistematica (aunque sea general) definida en este sentido?

Un saludo


Re: Propuesta validación ensayo de extracción y cuantificación de ADN
Autor:  Sero Fecha: 1/04/13 22:01

Hola, 

Te cuento desde mi experiencia en la certificacion de ISO 17025 en ensayos análiticos en Alimentos (de la cual hay una gran diferencia entre tu alcance y el mio), que siempre nos han pedido demostrar objetivamente los ensayos mediante resultados (y no hablamos de cuantificación en el alcance, pero si en el método de ensayo)

El requisito 4.5.4 de la norma expresa claramente que debes tener en cuenta la incertidumbre en el desempeño de tu método de ensayo, asi como también resultados obtenidos con otros métodos, comparaciones interlaboratorios, etc, etc. 

NO tengo claro si tu método es normalizado o no, pero creo que deberias defender bien los valores que se obtuvieron de la validación del método (entre ellos debes contar con: la incertidumbre de los resultados, el límite de detección, la selectividad del método, la linealidad, el límite de repetibilidad o de reproducibilidad, la robustez ante influencias externas o la sensibilidad cruzada frente a las interferencias provenientes de la matriz de la muestra o del objeto de ensayo)

Y además si fueron fijadas para el uso previsto, respondiendo a las necesidades de los clientes.

 

Saludos Cordiales, 

Sergio 


Re: Propuesta validación ensayo de extracción y cuantificación de ADN
Autor:  Etxe Fecha: 2/04/13 10:41

Gracias Sergio,

 

He encontrado un documento gep-isfg que se trata de una adaptación de la ILAC y la 17025, que recoge los requisitos de acreditación y normas de garantía de calidad en genética forense.

En este documento habla de estudios de especifidad de especie, estudios de sensibilidad, estudios de estabilidad somática y germinal, estudios de poblaciones y estudios de mezclas de fluidos.

Al mismo tiempo propone los controles de calidad que habría que establecer, controles negativos de extracción, controles de amplificación de ADN...

 En este sentido existen dos organismos internacionales, la Sociedad Internacional de Genética Forense (ISFG) y la Red Europea de Institutos de Cien¡cias Forenses (ENFSI), que propoenen o recominedan los criterios mínimos para validar la secuenciación del ADN.

Lo que no se habla en ninguno de los documentos, es del cálculo de la incertidumbre y y aunque se cuantifica parece que es un ensayo cualitativo (por eso los controles son positivos o negativos...) lo cual me hace dudar.

En fin...si saco algo en claro ya te contaré.

Por último, si alguien necesita que le facilite los documentos que he mencionado, que no dude en pedirmelos.

 Muchas gracias y un saludo


Re: Propuesta validación ensayo de extracción y cuantificación de ADN
Autor:  gioloc2000 Fecha: 9/07/13 22:34

Hola Etxe
Yo actualmente trabajo en un laboratorio de biología molecular y tengo a cargo tesistas. Mira yo he llevado diplomatura en SGC-17025 y me estoy encargando de los aspecto de Validacion de métodos moleculares. Uno de mis tesistas hará su tesis Validando un PCR para diagnostico cualitativo de un virus.
Yo te recomiendo que primero definas que fin tiene el laboratorio con el genotipado, y por que que? pues si prestaras solo servicio la norma 17025 exige que tu sistema de gestión solo informe (no concluya ni recomiende).BPL si te permite esto último, ademas puedes Validar preparando tu materiales de referencia con el análisis basico del límite de detección. Nosotros proponemos con la tesis del PCR Cualitativo tener limites de detección sin llegar al 100% de Incertidumbre. Creo yo que esta premisa cualitativa te puede servir para caraterizar tu material referencial y usarlo para Validar tu extracción y cuantificación de ADN.

Saludos

URL a este tema: http://www.portalcalidad.com/36692